盤點(diǎn)PCR技術(shù)
PCR技術(shù)是模擬體內(nèi)DNA的天然復(fù)制過(guò)程，在體外擴(kuò)增DNA分子的一種分子生物學(xué)技術(shù)，主要用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段。

在模塊溫度到達(dá)設(shè)定的變性溫度之前，模塊內(nèi)的樣品往往要一起經(jīng)歷加熱的過(guò)程，此時(shí)Taq酶仍具有一定活性，部分的引物和模板會(huì)在酶的作用下進(jìn)行非特異性的結(jié)合、延伸，消耗反應(yīng)物， 導(dǎo)致特異性擴(kuò)增減少。目前一般采用溫控系統(tǒng)或使用特殊Taq酶避免此現(xiàn)象的發(fā)生，稱之為熱啟動(dòng)PCR。

 Long PCR（長(zhǎng)片段PCR）則可以滿足較長(zhǎng)片段的DNA片段的擴(kuò)增需求，常用Taq酶和Pfu酶混合使用并配以特殊的緩沖液，避免錯(cuò)誤的dNTP加入到片段中。在正常10-15個(gè)循環(huán)之后，每一個(gè)循環(huán)的延伸時(shí)間都要上一次循環(huán)的延伸時(shí)間多出10秒左右，以此配合完成正確的延伸。

由于影響PCR效率的因素有很多，比如引物、退火溫度，循環(huán)次數(shù)等，逐一驗(yàn)證選擇適條件會(huì)花費(fèi)大量的時(shí)間及成本，因此，降落PCR是針對(duì)一系列不太的退火時(shí)間來(lái)考量的：退火溫度的起始值高于T值15℃，每一個(gè)（或n個(gè)）循環(huán)后比之前的循環(huán)的退火溫度都要低，直到溫度等于或低于T值，此后，在低溫環(huán)境下再進(jìn)行幾個(gè)循環(huán)，以此達(dá)到特異性擴(kuò)增的目的。高溫環(huán)境能使部分特異性結(jié)合發(fā)生，再降溫，某些非特異性擴(kuò)增已不具備優(yōu)勢(shì)，因此能夠擴(kuò)增。